ELISpot Pro: Human IL-4 (ALP)人IL-4檢測(cè)

MABTECH ELISPOT 實(shí)驗(yàn)原理

ELISPOT 實(shí)驗(yàn)使用 PVDF 膜為底的 96 孔板（cat：MSIPS 4510，Millipore），包被上特異性單克隆抗體（需要無毒，不含內(nèi)毒素，親和力高的抗體），以捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。

然后在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入待檢測(cè)的細(xì)胞和抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng)。在刺激物的刺激下，T 細(xì)胞就會(huì)在對(duì)應(yīng)的時(shí)間段分泌對(duì)應(yīng)的細(xì)胞因子。此時(shí)細(xì)胞因子就被包被在膜上的抗體所捕獲。

洗去細(xì)胞后，被捕獲的細(xì)胞因子可以與biotin標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，然后用酶標(biāo)親和素與biotin結(jié)合，進(jìn)行化學(xué)酶聯(lián)顯色，就可以在膜的局部形成一個(gè)個(gè)圓形的斑點(diǎn)（當(dāng)然，也可以使用熒光素標(biāo)記的第二抗體，這樣就省去了后續(xù)的化學(xué)顯色方法，并且一次可以檢測(cè)多種細(xì)胞因子），每一個(gè)斑點(diǎn)就對(duì)應(yīng)了當(dāng)初一個(gè)分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞。

統(tǒng)計(jì)膜上的斑點(diǎn)的數(shù)目，再除以當(dāng)初加入孔內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)，就可以計(jì)算出陽性細(xì)胞的百分比。

MABTECH該技術(shù)有以下三大優(yōu)點(diǎn)：

一：靈敏度高。一百萬個(gè)細(xì)胞中只要有一個(gè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子就可被檢測(cè)出來，相對(duì)于傳統(tǒng)的 ELISA 方法提升了 ２～３ 個(gè)數(shù)量級(jí)。

二：單細(xì)胞水平，活細(xì)胞功能檢測(cè)。ELISPOT 是用抗原直接刺激活細(xì)胞，檢測(cè)的是活細(xì)胞的功能。

三：操作簡便經(jīng)濟(jì)，可進(jìn)行高通量篩選。ELISPOT 沒有復(fù)雜的細(xì)胞體外擴(kuò)增過程，不使用同位素，按照標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作，一個(gè)實(shí)驗(yàn)者可以同時(shí)處理數(shù)百個(gè)樣品，效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它檢測(cè)方法。

ELISpot Pro: Human IL-4 (ALP)人IL-4檢測(cè)

MABTECH :3420-2APW-2包括：

Pre-coated plates, mAb IL4-I(2 white plates) Detection mAb: IL4-II, ALP(150 μl)

BCIP/NBT-plus substrate(25ml)

Positive control: Anti-CD3mAb (CD3-2) (100 μl)

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