ELISpot Pro: Human IFN?γ (ALP)人干擾素檢測

MABTECH ELISPOT 實驗原理

ELISPOT 實驗使用 PVDF 膜為底的 96 孔板（cat：MSIPS 4510，Millipore），包被上特異性單克隆抗體（需要無毒，不含內(nèi)毒素，親和力高的抗體），以捕獲細胞分泌的細胞因子。

然后在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入待檢測的細胞和抗原刺激物進行培養(yǎng)。在刺激物的刺激下，T 細胞就會在對應(yīng)的時間段分泌對應(yīng)的細胞因子。此時細胞因子就被包被在膜上的抗體所捕獲。

洗去細胞后，被捕獲的細胞因子可以與biotin標記的第二抗體結(jié)合，然后用酶標親和素與biotin結(jié)合，進行化學(xué)酶聯(lián)顯色，就可以在膜的局部形成一個個圓形的斑點（當(dāng)然，也可以使用熒光素標記的第二抗體，這樣就省去了后續(xù)的化學(xué)顯色方法，并且一次可以檢測多種細胞因子），每一個斑點就對應(yīng)了當(dāng)初一個分泌細胞因子的細胞。

統(tǒng)計膜上的斑點的數(shù)目，再除以當(dāng)初加入孔內(nèi)的細胞總數(shù)，就可以計算出陽性細胞的百分比。

MABTECH該技術(shù)有以下三大優(yōu)點：

一：靈敏度高。一百萬個細胞中只要有一個細胞分泌細胞因子就可被檢測出來，相對于傳統(tǒng)的 ELISA 方法提升了 ２～３ 個數(shù)量級。

二：單細胞水平，活細胞功能檢測。ELISPOT 是用抗原直接刺激活細胞，檢測的是活細胞的功能。

三：操作簡便經(jīng)濟，可進行高通量篩選。ELISPOT 沒有復(fù)雜的細胞體外擴增過程，不使用同位素，按照標準化的實驗操作，一個實驗者可以同時處理數(shù)百個樣品，效率遠遠高于其它檢測方法。

ELISpot Pro: Human IFN?γ (ALP)人干擾素檢測

MABTECH :3420-2APT-2包括：

Pre-coated plates, mAb 1-D1K(2 clear plates) Detection mAb: 7-B6-1, ALP (150 μl)

BCIP/NBT-plus substrate(25 ml)

Positive control: Anti-CD3 mAb (CD3-2) (100 μl)

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